IP/Co-IP Cell Lysis Buffer

【保存條件】 

4oC 保存 

【操作方法】 

裂解貼壁細(xì)胞的方法（裂解前可加入相應(yīng)蛋白酶/磷酸酶抑制劑）： 

1. 小心地從細(xì)胞中去除培養(yǎng)基。 用冰冷的 PBS 清洗一次。 

2. 將冰冷 IP 細(xì)胞裂解緩沖液添加到細(xì)胞板中（6 孔板中每孔加入 200-400μl），并在冰上孵 育 5 分鐘，中途不間斷混勻。 

3. 將裂解液轉(zhuǎn)移至微量離心管中，以約 13,000×g 的速度離心 10 分鐘，以在 4°C 下沉淀細(xì) 胞碎片。 

4. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的試管中，以測定蛋白濃度并進(jìn)行進(jìn)一步分析。 

裂解懸浮細(xì)胞的方法（裂解前可加入相應(yīng)蛋白酶/磷酸酶抑制劑）： 

1. 將細(xì)胞懸液以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細(xì)胞，丟棄上清液。 

2. 用冰冷的 PBS 洗滌細(xì)胞一次，以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細(xì)胞。 

3. 將冰冷的 IP 細(xì)胞裂解緩沖液添加到細(xì)胞沉淀中。每 50 mg 濕細(xì)胞沉淀（10：1 v / w）使 用 500μl 裂解緩沖液。 

4. 在冰上孵育裂解物 5 分鐘。通過在 4°C 下以?13,000×g 離心 10 分鐘去除細(xì)胞碎片。 

5. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的試管中，以測定蛋白濃度并進(jìn)行進(jìn)一步分析。 

【注意事項(xiàng)】 

1. 為了您的安全與健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。