產品細節圖:

質粒小提試劑盒-200次

品牌：genefist | 貨號：GF103-03

所屬大類 : 試劑

所屬小類 : 常用生化試劑

品牌 : genefist

規格 : 200次

原價 : ￥544.00

促銷價 : ￥544.00

儲存條件

該試劑盒置于室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。第一次使用前將RNase A加入溶液P1中，混勻后置于2-8℃保存，可穩定保存12個月以上。單獨包裝的RNase A 在室溫可穩定保存12個月以上。

產品簡介

本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，再通過離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司新型材料，高效、專一吸附DNA。以下操作步驟適用于提取1-5ml過夜培養的大腸桿菌，質粒提取得率和質量與宿主菌的種類和培養條件，細胞的裂解，質粒拷貝數，質粒的穩定性，抗生素等因素有關。

使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規的傳代細胞等。

注意事項請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A（將試劑盒中提供的 RNase A 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。

2.使用前請先檢查溶液 P2 和 P3 是否出現渾濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄

清。

3.注意不要直接接觸溶液 P2 和 P3，使用后應立即蓋緊蓋子。

4.所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心，速度為 12,000 rpm(~13,400×g )。

5.提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。

操作步驟

使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

1.取1-5 ml過夜培養的菌液加入離心管中，12,000 rpm(~13,400×g ) 離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2.向留有菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1（請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器吸吐或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌沉淀。

注意：如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。

3.向離心管中加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。

注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片斷。此時

菌液應變得清亮粘稠，所用時間不應超過5 min，以免質粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體

過多，裂解不徹底，應減少菌體量。

4.向離心管中加入250 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時將出現白色絮狀沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )離心10 min。

注意：P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上

清。

5.將上一步收集的上清液用移液器轉移到吸附柱CP1中（吸附柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP1放入收集管中。

6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g )離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP1放入收集管中。

7.重復操作步驟6。

8.將吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去

除。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP1開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。

9.將吸附柱CP1置于一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2min，12,000 rpm (~13,400×g) 離心2 min將質粒溶液收集到離心管中。

注意：洗脫緩沖液體積不應少于50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響，若后續做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。為了增加質粒的回收率，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，室溫放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g) 離心2 min，將質粒溶液收集到離心管中。

低拷貝或大質粒（ >10kb）提取

如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5-10 ml過夜培養物，同時按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液TB應在65-70℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。其它步驟相同

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1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337

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質粒小提試劑盒-200次

品牌：genefist | 貨號：GF103-03

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