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產品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag?)是一種新興的DNA-蛋白質互作研究方法。CUT&Tag? 以融合了protein A/G 的Tn5 轉座酶為核心,融合蛋白通過protein A/G 與抗體結合,使得Tn5 被栓系在靶位點周圍,從而在目的位點附近進行酶切反應,并同時引入二代測序所必需的接頭序列,產物DNA 經過后續提取與PCR 擴增后,得到直接用于測序的文庫。CUT&Tag?與傳統的ChIP-Seq 技術相比較,實驗不需要超聲打斷,也不需要傳統的連接法添加測序接頭,操作簡單、周期短、信噪比高、重復性好、細胞用量少,為極低起始細胞量和單細胞測序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技術誕生以來,經過大量的實踐,發現該技術在組蛋白修飾及部分轉錄因子與 DNA 互作研究中可以獲得高信噪比的結果,但是針對一些與 DNA 結合力較弱或者結合具有高度動態性的 DNA 結合蛋白,較難得到理想的實驗結果。針對此問題,近岸蛋白開發了可對細胞進行高濃度甲醛交聯的CUT&Tag實驗流程。為轉錄因子 -DNA 互作研究提供一種新的思路,這種需要甲醛交聯的CUT&Tag實驗被稱為fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS? CUT&Tag? 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)試劑盒包含常規非交聯細胞CUT&Tag及甲醛交聯細胞fcCUT&Tag實驗中所需的各種緩沖液、ConA磁珠、DNA純化磁珠、引物等全套建庫試劑,可以用于組蛋白修飾和轉錄因子的染色質結合狀態研究。與傳統的CUT&Tag試劑盒相比,該試劑盒既可以對自然狀態的細胞進行蛋白質-DNA互作研究,也可以對高濃度甲醛交聯的細胞進行蛋白質-DNA互作研究,一盒兩用。試劑盒包含CUT&Tag? 實驗中孵育抗體、轉座體、構建文庫的相關試劑,可以用于組蛋白修飾和轉錄因子的染色質結合狀態研究。本試劑盒包含高活性的ChiTag? pAG-Tn5, 相較于最初版本的pA-Tn5 轉座酶,pAG結構域對兔、鼠等多種來源抗體具有廣譜的強親和性,在實驗抗體的選擇上具有更大的空間。針對CUT&Tag?打斷產物DNA 提取過程中小片段丟失的問題,本試劑盒提供優化的Tagment DNA Extract Beads, 相較于常規的片段分選磁珠可以完整的回收CUT&Tag? 產物中的小片段DNA, 大大簡化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁瑣操作。此外,本試劑盒還提供了陽性抗體H3K4me3(兔抗)以及相應的二抗(羊抗兔IgG) ,用于陽性對照實驗(僅B 包裝提供陽性抗體)。圖1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag?結合示意圖 圖2: CUT&Tag 實驗流程簡圖 產品用途DNA-蛋白質互作研究。在常見的哺乳動物細胞上用于替代傳統的ChIP-Seq 技術,特別適用于細胞數量較少的樣本,也可應用于經過處理的植物和酵母樣本上。保存條件詳見說明書僅供科研或生產使用,不可直接應用于人體。
產品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag?)是一種新興的DNA-蛋白質互作研究方法。CUT&Tag? 以融合了protein A/G 的Tn5 轉座酶為核心,融合蛋白通過protein A/G 與抗體結合,使得Tn5 被栓系在靶位點周圍,從而在目的位點附近進行酶切反應,并同時引入二代測序所必需的接頭序列,產物DNA 經過后續提取與PCR 擴增后,得到直接用于測序的文庫。CUT&Tag?與傳統的ChIP-Seq 技術相比較,實驗不需要超聲打斷,也不需要傳統的連接法添加測序接頭,操作簡單、周期短、信噪比高、重復性好、細胞用量少,為極低起始細胞量和單細胞測序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技術誕生以來,經過大量的實踐,發現該技術在組蛋白修飾及部分轉錄因子與 DNA 互作研究中可以獲得高信噪比的結果,但是針對一些與 DNA 結合力較弱或者結合具有高度動態性的 DNA 結合蛋白,較難得到理想的實驗結果。針對此問題,近岸蛋白開發了可對細胞進行高濃度甲醛交聯的CUT&Tag實驗流程。為轉錄因子 -DNA 互作研究提供一種新的思路,這種需要甲醛交聯的CUT&Tag實驗被稱為fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS? CUT&Tag? 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)試劑盒包含常規非交聯細胞CUT&Tag及甲醛交聯細胞fcCUT&Tag實驗中所需的各種緩沖液、ConA磁珠、DNA純化磁珠、引物等全套建庫試劑,可以用于組蛋白修飾和轉錄因子的染色質結合狀態研究。與傳統的CUT&Tag試劑盒相比,該試劑盒既可以對自然狀態的細胞進行蛋白質-DNA互作研究,也可以對高濃度甲醛交聯的細胞進行蛋白質-DNA互作研究,一盒兩用。試劑盒包含CUT&Tag? 實驗中孵育抗體、轉座體、構建文庫的相關試劑,可以用于組蛋白修飾和轉錄因子的染色質結合狀態研究。本試劑盒包含高活性的ChiTag? pAG-Tn5, 相較于最初版本的pA-Tn5 轉座酶,pAG結構域對兔、鼠等多種來源抗體具有廣譜的強親和性,在實驗抗體的選擇上具有更大的空間。針對CUT&Tag?打斷產物DNA 提取過程中小片段丟失的問題,本試劑盒提供優化的Tagment DNA Extract Beads, 相較于常規的片段分選磁珠可以完整的回收CUT&Tag? 產物中的小片段DNA, 大大簡化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁瑣操作。此外,本試劑盒還提供了陽性抗體H3K4me3(兔抗)以及相應的二抗(羊抗兔IgG) ,用于陽性對照實驗(僅B 包裝提供陽性抗體)。圖1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag?結合示意圖圖2: CUT&Tag 實驗流程簡圖產品用途DNA-蛋白質互作研究。在常見的哺乳動物細胞上用于替代傳統的ChIP-Seq 技術,特別適用于細胞數量較少的樣本,也可應用于經過處理的植物和酵母樣本上。保存條件詳見說明書僅供科研或生產使用,不可直接應用于人體。Novoprotein是蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司的注冊商標。請訪問我們的注冊商標頁面。其他商標是其他所有者的財產。

產品介紹 EasyFusion Assembly Master Mix 是一種快速、簡單且高效的定向同源重組克隆試劑盒,可將目的片段一個或多個 (PCR 產物)定向克隆到任意載體的任意位置。該技術不依賴于 T4 連接酶、不受載體和目的片段的酶切位點限制, 僅需 15-30 分鐘實現高效無縫連接。 操作步驟 1.線性化載體準備 可以通過以下兩種方法獲得線性化載體,最終載體的濃度需>10 ng/μl。(高濃度的載體有利于提高效率)。 (1)選擇合適的酶切位點線性化載體。(單酶切或雙酶切均可, 5′端突出、3′端突出或平末端均適用) (2)以載體為模板,設計引物,通過 PCR 的方式擴增出需要的線性化載體 2.擴增插入片段引物設計 通常通過 PCR 獲得目的片段,引物設計要保證目的片段兩端有至少 15bp-20bp 序列與線性化載體的兩端一致的 同源序列。PCR 每條引物長度至少在 35-40bp 之間,包括 5′ 端和 3′端與線性載體同源的 15bp-20bp(不包括酶 切位點)以及目的片段特異性序列 20-25bp。 (1)單個片段的引物設計: 引物包含目的基因特異性序列和重疊序列 插入片段正向擴增引物設計方式為: 5′-上游載體末端 15-20bp 同源序列+目的基因特異性正向擴增引物序列(20-25bp)-3′ 插入片段反向擴增引物設計方式為: 5′-下游載體末端 15-20bp 同源序列+目的基因特異性正向擴增引物序列(20-25bp)-3′ 設計引物時,可以參考以下實例(以 pUC19 線性化載體為例): 3.PCR 擴增插入片段 推薦使用高保真聚合酶進行 PCR 擴增插入片段,以減少擴增突變的產生,選擇聚合酶時無需考慮末端有無 A 加尾 發生(重組過程中將會被去除,在最終載體中不會出現)。PCR 擴增結束后,對目的 PCR 產物進行純化:若是擴增模 板與克隆載體抗性不同,且 PCR 產物條帶電泳單一,產物可以無需純化直接用于重組反應,或者對 PCR 產物進行脫鹽 等簡單純化;否則,需要進行瓊脂糖凝膠電泳回收特異性的目的 PCR 片段。 4.重組反應進行 取出 EasyFusion Assembly Master mix, 置于冰浴中,配制下圖應體系(如果不慎將液體粘在管壁,可通過短暫離心沉降) 注意:10 ul 反應體系中,載體和各插入片段建議量在 20-50ng 之間,載體與各插入片段的最佳摩爾比為 1:2-1:3 輕輕混勻反應體系,50℃反應 15-30 分鐘(對于多片段重組或大片段重組,建議反應時間 30 分鐘,可延長反應時 間至 1 小時);待反應結束后,將離心管置于冰上冷卻數秒,之后將重組產物保存于-20℃或用于轉化。 5. 反應產物轉化、涂板及克隆鑒定 建議所使用的感受態細胞效率要達到> 5X 107 cfu/ug。轉化步驟按照不同菌種的要求進行或者按標準轉化操作 進行即可。菌落長出之后,建議采用菌落 PCR 進行陽性克隆鑒定,或者對樣品進行測序確保正確。 保存條件及組成成分 -20℃保存及冰袋運輸 組成成分:2X EasyFusion Assembly Master Mix , 125ul; Linearized pUC19 Vector (10ng/ul),5ul;Control Insert(0.5kb, 20ng/ul),5ul 注意事項 1. 線性化載體或目的片段的純化的品質及濃度等較差會顯著降低克隆陽性率及克隆數。 2. 重組質粒大小的增加(>12kb),克隆效率會顯著降低,選擇穩定性更好的感受態及轉化效率更高效的感受態細胞。 3. 菌落較少時,建議適當增加重組反應產物的體積量,或者提高轉化產物量等。 4. 隨著重組片段數目的增加,克隆效率降低,建議增加引物重疊序列長度或適當延長反應時間。

產品介紹 本試劑盒可以快速從細胞、細菌和動物組織中提取總RNA。本產品中裂解液(RLT Lysis Bufer)可以快速裂解細胞和滅活RNA酶,通過DNA清除/RNA吸附通用柱吸附技術,去除基因組DNA殘留,同時在乙醇輔助結合條件下,高效地結合在吸附柱的硅膠膜上,再經過多次的洗滌離心后,去除細胞代謝物和蛋白質等雜質,獲得純凈的總RNA。純化的RNA可用于RT-PCR,NorthernBlotPoly(A)+篩選等多種實驗。 產品亮點 安全性高:無需使用苯酚,氯仿等試劑,無需乙醇沉淀 使用范圍廣:對細胞、細菌、動物組織提取均適用 操作簡單快速:全程室溫操作,10-20分鐘可完成純化步驟 提取純度高:經多次柱吸附和洗滌,基因組DNA和蛋白質污染低 首次使用前,在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入標簽指定量的無水乙醇(5 preps/50 preps分別加入 4.8 ml/48 ml 無水乙醇),充分混勻后使用,并做好標記。 *注意觀察各溶液是否有析出或渾濁(尤其冬季低溫環境時),可 37℃溫浴復溶至溶液澄清,避免影響使用效果。 運輸和保存方式 常溫運輸,室溫避光保存,有效期 12 個月。2-4°C 可保存更長時間

產品介紹 TRnaZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細胞中提取總 RNA 的一種廣譜型試劑。TRnaZol Reagent 內含優化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質,能迅速破碎細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶,最大 限度地裂解樣品且同時保證 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 離心后,溶液會分成三層:上 層無色水相、中間層和下層紅色有機相,其中 RNA 分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便,顏 色分明,提取的總 RNA 完整性好,純度高,無蛋白和 DNA 的污染,可用于各種分子生物學實驗,如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 產品特色 ? 安全性高:使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ? 使用范圍廣:對人、動物、植物和細菌組織提取均適用 ? 顏色分明:溶液呈粉紅色,便于分離水相和有機相 ? 提取純度高:DNA 和蛋白質污染最低,可用于多種下游實驗 產品介紹 TRnaZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細胞中提取總 RNA 的一種廣譜型試劑。TRnaZol Reagent 內含優化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質,能迅速破碎細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶,最大 限度地裂解樣品且同時保證 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 離心后,溶液會分成三層:上 層無色水相、中間層和下層紅色有機相,其中 RNA 分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便,顏 色分明,提取的總 RNA 完整性好,純度高,無蛋白和 DNA 的污染,可用于各種分子生物學實驗,如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 產品特色 ? 安全性高:使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ? 使用范圍廣:對人、動物、植物和細菌組織提取均適用 ? 顏色分明:溶液呈粉紅色,便于分離水相和有機相 ? 提取純度高:DNA 和蛋白質污染最低,可用于多種下游實驗 組成成分及保存條件

產品介紹 NCM Western Blot Stripping Buffer(蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液)是新賽美生物生產的用于去除結合在印跡膜(PVDF膜或NC膜)上的一抗和二抗的洗滌液。該產品作用溫和,不含有毒有味的巰基乙醇,在不影響目的蛋白的情況下,可使同一張印跡膜進行多次抗體檢測。省去反復電泳和轉膜等步驟,節省樣品及時間,加快Western Blot檢測實驗。 產品特色 ? 獨有的配方,去除抗體效力強 ? 對蛋白作用溫和,不影響目的蛋白 ? 不含有巰基乙醇,無毒無味,室溫條件下使用保存 ? 適用PVDF膜和NC膜,加速抗體檢測 操作步驟 1. 將曝光結束的蛋白印跡膜充分浸入適當體積的NCM Western BlotStripping Buffer(蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液)中,抗體剝離液要充分覆蓋膜的表面,在脫色搖床上,室溫中速震蕩孵育10分鐘,棄去剝離液。 2. (可選)重復步驟1。(對于信號正常或較弱的印跡膜也可以不必重復步驟1,如果是內參等表達量高的蛋白,可以重復步驟1三次,以保證徹底去除了抗體。) 3. 每用鑷子取出印跡膜,加入洗滌緩沖液TBST或PBST,在脫色搖床上中速震蕩洗滌3次,每次5分鐘。 4. (可選)通過顯色曝光等方法檢測抗體是否去除,如檢測到信號,需重復步驟1,確保抗體被除盡。 5. 對印跡膜重新進行封閉,進入下一輪Western Blot 實驗。 保存條件 室溫保存,運輸,一年有效 注意事項 1. 建議先檢查表達量低的蛋白,再用NCM Western Blot Stripping Buffer處理印跡膜后,檢測表達量高的蛋白; 2. 本品適用于NC膜和PVDF膜,推薦使用PVDF膜,效果更佳; 3. 為了安全和健康,請穿實驗服,戴手套操作

產品介紹 NCM Western Blot Stripping Buffer(蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液)是新賽美生物生產的用于去除結合在印跡膜(PVDF膜或NC膜)上的一抗和二抗的洗滌液。該產品作用溫和,不含有毒有味的巰基乙醇,在不影響目的蛋白的情況下,可使同一張印跡膜進行多次抗體檢測。省去反復電泳和轉膜等步驟,節省樣品及時間,加快Western Blot檢測實驗。 產品特色 ? 獨有的配方,去除抗體效力強 ? 對蛋白作用溫和,不影響目的蛋白 ? 不含有巰基乙醇,無毒無味,室溫條件下使用保存 ? 適用PVDF膜和NC膜,加速抗體檢測 操作步驟 1. 將曝光結束的蛋白印跡膜充分浸入適當體積的NCM Western BlotStripping Buffer(蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液)中,抗體剝離液要充分覆蓋膜的表面,在脫色搖床上,室溫中速震蕩孵育10分鐘,棄去剝離液。 2. (可選)重復步驟1。(對于信號正常或較弱的印跡膜也可以不必重復步驟1,如果是內參等表達量高的蛋白,可以重復步驟1三次,以保證徹底去除了抗體。) 3. 每用鑷子取出印跡膜,加入洗滌緩沖液TBST或PBST,在脫色搖床上中速震蕩洗滌3次,每次5分鐘。 4. (可選)通過顯色曝光等方法檢測抗體是否去除,如檢測到信號,需重復步驟1,確保抗體被除盡。 5. 對印跡膜重新進行封閉,進入下一輪Western Blot 實驗。 保存條件 室溫保存,運輸,一年有效 注意事項 1. 建議先檢查表達量低的蛋白,再用NCM Western Blot Stripping Buffer處理印跡膜后,檢測表達量高的蛋白; 2. 本品適用于NC膜和PVDF膜,推薦使用PVDF膜,效果更佳; 3. 為了安全和健康,請穿實驗服,戴手套操作

產品介紹 新賽美生物的磷酸酶抑制劑混合液(ProtLytic Phosphatase Inhibitor Cocktail)是經優化好的多種 磷酸酶抑制劑的混合物組成的,是一種廣譜的抑制劑混合物,在抽提和純化蛋白時能夠 有效防止蛋白被內源性的磷酸酶降解。成分主要含有 sodium fluoride,sodium orthovanadate,Sodium Pyrophosphate,β-glycerophosphate,Imidazole 等多種抑制劑, 主要抑制酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、ATP 酶等,用于蛋白純化,蛋白免疫印跡, 免疫共 沉淀,免疫熒光,免疫組織化學,激酶測定等研究。 操作步驟 將磷酸酶抑制劑混合液,根據實驗體系的需求,按照 1:100 的比率將其加入到樣品 溶液中(如組織抽提物或細胞裂解物)。 保存條件 4 ℃保存,冰袋運輸,至少 1 年有效; 注意事項 1. 磷酸酶抑制劑會損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危 險 2. 不同樣品中含有的磷酸酶量及種類不同,可根據具體實驗調整加入磷酸酶抑制劑混合液 的量,如加入 2 倍,3 倍等量,才能有效抑制內源性磷酸酶的作用 3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴防護手套操作

產品介紹 新賽美生物的蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合液(Protease and PhosphataseInhibitor Cocktail) 是經優化好的多種蛋白酶和磷酸酶抑制劑的混合物組成的,僅用一種溶液即可方便地完 成在抽提和純化蛋白時,能夠有效防止蛋白被內源性的蛋白酶和磷酸酶的降解。成分含 有 Aprotinin,Bestatin,Leupetin,Pepstatin,PMSF,NaF,Sodium Orthovanadate,Sodium Pyrophosphate 等多種蛋白酶和磷酸酶家族的抑制劑,主要抑制氨基肽酶、半胱氨酸和 絲氨酸蛋白酶、絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸蛋白酶和磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、堿性磷 酸酶、酸性磷酸酶等,用于蛋白純化,蛋白免疫印跡, 免疫共沉淀,免疫熒光,免疫組 織化學,激酶測定等研究。 操作步驟 在室溫下溶解含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合液,混勻之后,根據實驗體系的需求, 按照 1:100 的比率將抑制劑混合液加入到樣品溶液中(如組織抽提物或細胞裂解物)。 保存條件 -20 ℃保存,冰袋運輸,至少 1 年有效; 注意事項 1. 蛋白酶和磷酸酶抑制劑嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收 后有致命危險; 2. 不同樣品中含有的蛋白酶和磷酸酶的量及種類不同,可根據具體實驗調整加入抑制劑混 合液的量,如加入 2 倍,3 倍等量,才能有效抑制內源性蛋白酶和磷酸酶的作用 3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴防護手套操作

產品介紹 RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay,是一種傳統的細胞組織快速裂解液。新賽美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 等。主要成分是:50mMTris(pH 7.6),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodiumdeoxycholate,0.1% SDS 等多種裂解劑和抑制劑,能有效地抑制蛋白 降解。 操作步驟 對于培養細胞樣品: 1. 取適當量的NCM RIPA Buffer 裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。 注意:NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制劑,根據需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制劑。 2. a.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使 裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 b. 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。 對于組織樣品: 1. 把組織剪切成細小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃 度為 1mM。 3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加 更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量) 4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。 5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋使樣品裂解 充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點 是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。 保存條件 4℃保存,室溫運輸,1 年有效; 注意事項: 1.RIPA 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因 組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清 用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明 膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如 NFκB、p53 等時,通 常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。 2.為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。 3.PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。 4.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 5.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦 直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫療保健結構咨詢。

產品介紹 Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,是MTT,XTT等的替代方法,一種基于WST-8(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的Formazan。對于同樣的細胞,顏色的深淺(生成的Formazan量)和細胞數目呈線性關系。可用于藥物篩選、細胞增殖和毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。 操作步驟 一. 制作標準曲線(測定細胞具體數量) 1.先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞; 2.按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做4-7個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔; 3.接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后加入CCK-8試劑(按每100 μL培養基加10μL CCK-8)培養一定時間后測定OD值,制作出一條以細胞數量為橫坐標,OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。(使用此標準曲線的前提條件是試驗條件完全一致) 二. 細胞活性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養一段時間; 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡,它們會影響OD值的讀數); 3.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時; 4.用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。 三.細胞增殖-毒性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養24小時; 2.向培養板加入不同濃度的待測藥物; 3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間; 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡); 5.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時; 6.用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。 注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次, 然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 四.活力計算 細胞存活率*(%)=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*(%)=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:實驗孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8 溶液和藥物溶液); Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液,不含藥物) ; Ab: 空白孔吸光度 (含培養基、CCK-8 溶液,不含細胞、藥物) 。 保存條件 4℃避光保存,有效期12個月;-20℃避光保存,有效期24個月 實驗應用 1. 細胞增殖測定:CCK-8是水溶性的,在培養基中穩定且無毒。 2. 細胞活性分析,包括細胞毒性:代謝活性以及染料的形成與細胞的活性和損傷成比例。 3. 細胞因子分析:測定細胞因子誘導的增殖,必要時,可在試驗結束時回收和擴增細胞 注意事項 1.CCK-8的培養時間一般為1-4小時,但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度,根據細胞種類而定,需要摸索條件,CCK-8的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。 2.使用96孔板進行檢測時,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問 題。一方面,由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,所以還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。 4.加入藥物中如含有金屬,對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%,90% 的顯色反應,使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,將會100% 抑制。 5.培養基中的酚紅不會影響實驗結果,酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。 6.本產品可以檢測革蘭氏陰性細菌,但不能檢測革蘭氏陽性細菌和酵母細胞。向100μL培養液中加入10μL CCK-8溶液,并培養1-4小時或過夜。 7.CCK-8試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深,OD值不斷增加(注: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的)。 8.要測定細胞的具體數量,建議同時做標準曲線。 9.建議采用多通道移液器,以減小平行孔間的差異。 10.以下方法可以終止CCK-8反應(96 孔板):(a).在顯色反應后,將培養板放置4°C冰箱內。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸鈉)溶液。注意:反應停止后,應在24小時內測定。 11. 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。 12. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產品介紹 Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,是MTT,XTT等的替代方法,一種基于WST-8(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的Formazan。對于同樣的細胞,顏色的深淺(生成的Formazan量)和細胞數目呈線性關系。可用于藥物篩選、細胞增殖和毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。 操作步驟 一. 制作標準曲線(測定細胞具體數量) 1.先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞; 2.按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做4-7個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔; 3.接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后加入CCK-8試劑(按每100 μL培養基加10μL CCK-8)培養一定時間后測定OD值,制作出一條以細胞數量為橫坐標,OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。(使用此標準曲線的前提條件是試驗條件完全一致) 二. 細胞活性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養一段時間; 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡,它們會影響OD值的讀數); 3.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時; 4.用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。 三.細胞增殖-毒性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養24小時; 2.向培養板加入不同濃度的待測藥物; 3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間; 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡); 5.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時; 6.用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。 注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次, 然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 四.活力計算 細胞存活率*(%)=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*(%)=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:實驗孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8 溶液和藥物溶液); Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液,不含藥物) ; Ab: 空白孔吸光度 (含培養基、CCK-8 溶液,不含細胞、藥物) 。 保存條件 4℃避光保存,有效期12個月;-20℃避光保存,有效期24個月 實驗應用 1. 細胞增殖測定:CCK-8是水溶性的,在培養基中穩定且無毒。 2. 細胞活性分析,包括細胞毒性:代謝活性以及染料的形成與細胞的活性和損傷成比例。 3. 細胞因子分析:測定細胞因子誘導的增殖,必要時,可在試驗結束時回收和擴增細胞 注意事項 1.CCK-8的培養時間一般為1-4小時,但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度,根據細胞種類而定,需要摸索條件,CCK-8的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。 2.使用96孔板進行檢測時,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問 題。一方面,由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,所以還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。 4.加入藥物中如含有金屬,對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%,90% 的顯色反應,使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,將會100% 抑制。 5.培養基中的酚紅不會影響實驗結果,酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。 6.本產品可以檢測革蘭氏陰性細菌,但不能檢測革蘭氏陽性細菌和酵母細胞。向100μL培養液中加入10μL CCK-8溶液,并培養1-4小時或過夜。 7.CCK-8試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深,OD值不斷增加(注: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的)。 8.要測定細胞的具體數量,建議同時做標準曲線。 9.建議采用多通道移液器,以減小平行孔間的差異。 10.以下方法可以終止CCK-8反應(96 孔板):(a).在顯色反應后,將培養板放置4°C冰箱內。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸鈉)溶液。注意:反應停止后,應在24小時內測定。 11. 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。 12. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產品介紹 WaterBathCleaner(水浴鍋抑菌劑)是一種即用型的,專門用于清除和抑制水浴鍋中細 菌、真菌、支原體等微生物清除的一款產品。本品主要成分是一種陽離子表面活性劑, 系廣譜殺菌劑,能改變細菌胞漿膜通透性,使菌體胞漿物質外滲,阻礙其代謝而起殺滅 作用。能夠有效清除細胞培養的各類細菌、真菌、支原體等微生物,尤其對水中的細菌、 真菌及其芽孢和孢子抑制可長達 7天。 產品特色 ? 安全性:使用濃度下對皮膚和組織無刺激性,無任何不良反應 ? 高效廣譜殺菌劑,對細菌、真菌、支原體等殺力強 ? 對金屬、橡膠制品無腐蝕作用 ? 安全長效,抑制效果長達 7天 操作步驟 1.本品水浴鍋抑菌劑以 1000倍的濃縮液形式提供,初次使用建議先清潔水浴鍋, 2.然后直接按照 1:1000的比例向水浴鍋中加入本品 保存條件 室溫保存運輸,至少 1年有效; 注意事項 1.本品僅供科研使用,勿做其他用途 2.使用本試劑前請仔細閱讀說明書 3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
產品簡介Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 是一種非離子型表面活性劑(或稱去污劑)。分子量為646.86(C34H62O11)。它能溶解脂質,以增加細胞膜對抗體的通透性。免疫細胞化學中Triton X-100常用濃度為1%和0.3%,其中1%的Triton X-100常用于漂洗組織標本,0.3%的Triton X-100則常用于稀釋血清,0.1%的Triton X-100常用于LAMP(環介導等溫擴增),配制BSA等。通常是先配制成30%的Triton X-100儲備液,臨用時稀釋至所需濃度。產品組成 產品編號產品名稱10 mL50 mL100 mLStorageE-IR-R122Triton X-10010 mL50 mL100 mLRT使用說明本品為Triton X-100溶液,建議先配制成30%的Triton X-100儲備液,臨用時稀釋至所需濃度。30%的Triton X-100儲備液的制備:取3 mL的Triton X-100,加入到7 mL的1x PBS buffer中,即為30%的Triton X-100。臨用前,用1x PBS buffer稀釋成需要的濃度即可。保存條件室溫保存,有效期12個月。注意事項1. 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Recombinant Human SHH 細胞因子 產品描述Recombinant Human Sonic Hedgehog is produced by our E.coli expression system and the target gene encoding Cys24-Gly197 is expressed.蛋白編號Q15465 產品別稱Sonic Hedgehog Protein; SHH; HHG-1分子量19.69 KDa表觀分子量19 KDa, reducing conditions劑型描述Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20mM PB, 100mM NaCl, 1mM DTT, pH 7.5.內毒素Less than 0.001 ng/μg (0.01 EU/μg) as determined by LAL test.純度-SDS-PAGEGreater than 95% as determined by reducing SDS-PAGE. (QC verified) 復溶Always centrifuge tubes before opening.Do not mix by vortex or pipetting.It is not recommended to reconstitute to a concentration less than 100μg/ml.Dissolve the lyophilized protein in distilled water.Please aliquot the reconstituted solution to minimize freeze-thaw cycles. 保存條件Lyophilized protein should be stored at ≤ -20°C, stable for one year after receipt.Reconstituted protein solution can be stored at 2-8°C for 2-7 days.Aliquots of reconstituted samples are stable at ≤ -20°C for 3 months.運輸條件The product is shipped at ambient temperature.Upon receipt, store it immediately at the temperature listed below.產品背景Sonic Hedgehog Homolog (SHH) belongs to a three-protein family called hedgehog. The other two family members are Indian Hedgehog (IHH) and Desert Hedgehog (DHH). Hedgehog proteins are key signaling molecules in embryonic development. SHH is expressed in various embryonic tissues and plays critical roles in regulating the patterning of many systems, such as limbs and brain. SHH also plays an important role in adult, including the division of adult stem cells and the development of certain cancers and other diseases. Human SHH is expressed as a 45kDa precursor, and undergoes a series of processing during secretion. After the removal of the signal peptide, a protease within the C-terminal domain catalyzes the cleavage of SHH into a 20 kDa N-terminal signaling domain (SHH-N) and a 25 kDa C-terminal domain (SHH-C). SHH-N has the “all signaling” capability. SHH-N binds to the 12 pass transmembrane protein Patched (Ptc) on cell surface, which releases the repression of the activity of Smoothened (Smo), a G-protein coupled receptor, by Ptc.僅供科研或生產使用,不可直接應用于人體。Novoprotein是蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司的注冊商標。請訪問我們的注冊商標頁面。其他商標是其他所有者的財產。

Triiodothyronine;三碘甲狀腺氨酸產品簡介CAS6893-02-3中文名稱三碘甲狀腺氨酸英文名稱Triiodothyronine別名T3;O-(4-Hydroxy-3-iodophenyl)-3,5-diiodo-L-tyrosine;L-3,3,5-Tresitope;3,3,5-Triiodo-L-thyronine;Lyothyronine;碘噻羅寧純度≥98%分子式C15H12I3NO4分子量650.97外觀(性狀)White to brown Solid儲存條件Powder : -20℃, 2 years;In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months溶解性Soluble in DMSO ≥10mg/mLECEINECS 229-999-3MDLMFCD00002593InChIKeyAUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-NInChIInChI=1S/C15H12I3NO4/c16-9-6-8(1-2-13(9)20)23-14-10(17)3-7(4-11(14)18)5-12(19)15(21)22/h1-4,6,12,20H,5,19H2,(H,21,22)/t12-/m0/s1PubChem CID5920SMILESOC1=C(I)C=C(OC2=C(I)C=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C2I)C=C1描述是有效的甲狀腺激素受體 TRα 和 TRβ 的激動劑。(It is a potent agonist of thyroid hormone receptors TRα and TRβ.)靶點Thyroid Hormone Receptor通路Endocrinology & Hormones生物活性3,3',5-Triiodo-L-thyronine是有效的甲狀腺激素受體 TRα 和 TRβ 的激動劑,Ki 值為2.3 nM。[1-2]In Vitro3, 3', 5-三碘-L-甲狀腺素 (T3, 100nM) 刺激TRβ1過表達的肝細胞增殖[1]。 3, 3', 5-三碘-L-甲狀腺素與人β1甲狀腺激素受體 (hTRβ1) 結合, 并改變其構象。 3, 3', 5-三碘-L-甲狀腺素促進生長, 誘導分化并調節代謝作用[2]。細胞實驗制備甲狀腺激素耗盡 (Td) 血清。進行甲基纖維素中肝癌細胞的生長。為了確定3, 3', 5-三碘-L-甲狀腺素 (T3) 對細胞生長的影響, 在第0天將細胞以3×10 4個細胞/ 60mm培養皿的密度接種, 并在含有培養基的培養基中培養。 5%常規血清, 5%Td或5%Td和100nM T3。初始接種后3周, 甲基纖維素中的集落形成評分[1]。數據來源文獻[1]. Lin KH, et al. Stimulation of proliferation by 3, 3', 5-triiodo-L-thyronine in poorly differentiated human hepatocarcinoma cells overexpressing beta 1 thyroid hormone receptor. Cancer Lett. 1994 Oct 14; 85 (2) :189-94.[2]. Bhat MK, et al. Conformational changes of human beta 1 thyroid hormone receptor induced by binding of 3, 3', 5-triiodo-L-thyronine. Biochem Biophys Res Commun. 1993 Aug 31; 195 (1) :385-92.Note以上數據均來自公開文獻, Solarbio暫未進行獨立驗證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.規格50mg 10mM*1mL in DMSO 100mg 500mg單位支

Caspase-9活性檢測試劑盒產品簡介有效期-20℃儲存條件6個月中文名稱Caspase-9活性檢測試劑盒英文名稱Caspase-9 Activity Assay Kit檢測方法比色法 Colorimetric單位盒規格20T 50T 100TCaspase-9也稱ICE-LAP6或Mch6,可與細胞色素c和Apaf1形成復合物被激活,并進一步激活細胞凋亡的最關鍵酶caspase-3,從而觸發凋亡級聯反應。因此,Caspase-9是細胞凋亡信號轉導過程中重要的上游caspase。細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩態具有十分重要的調節作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。Caspase-9也稱ICE-LAP6或Mch6,可與細胞色素c和Apaf1形成復合物被激活,并進一步激活細胞凋亡的最關鍵酶caspase-3,從而觸發凋亡級聯反應。因此,Caspase-9是細胞凋亡信號轉導過程中重要的上游caspase。其激活可以通過磷酸化進行調控。試劑盒測定原理基于Caspase-9特異水解其多肽底物Ac-LEHD-pNA (N-acetyl-Leu-Glu-His-Asp-p-nitroanilide),釋放出游離的硝基苯胺pNA,后者呈黃色在405 nm具有最大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-9的水解活性。反應體系100微升,試劑盒提供的試劑,除標準曲線外可進行50或100次樣品測定。適用:測定哺乳動物組織、細胞caspase-9活性。組成與儲存:1. 裂解緩沖液: 20 ml ,4 oC2. 反應緩沖液: 10 ml ,4 oC3. 2 mM Ac-LEHD-pNA底物: 0.5 ml,-20 oC避光4. 10 mM pNA標準品: 0.5 ml,-20 oC避光以上標出的量為100次檢測,50次檢測的試劑量減半。試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩定。所需儀器:酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。工作波長:最大吸收波長405 nm,如不具備也可在400~450 nm范圍內測定。

Pinocembrin;喬松素產品簡介CAS480-39-7中文名稱喬松素英文名稱Pinocembrin別名Dihydrochrysin;Galangin flavanone;5,7-Dihydroxyflavanone;松屬素純度HPLC≥98%分子式C15H12O4分子量256.25外觀(性狀)White to off-white Solid儲存條件Powder : 2-8℃, 2 years; In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months溶解性Soluble in DMSOMDLMFCD06858345SMILESO=C1C[C@@H](C2=CC=CC=C2)OC3=CC(O)=CC(O)=C13描述為競爭性的組氨酸脫羧酶 (histidine decarboxylase) 抑制劑。(It is a competitive histidine decarboxylase inhibitor.)靶點Histidine decarboxylase通路Metabolic Enzyme&Protease生物活性Pinocembrin ((+)-Pinocoembrin) 是從蜂膠中得到的黃酮類物質,為競爭性的組氨酸脫羧酶 (histidine decarboxylase) 抑制劑,同時為有效的抗過敏劑,具有抗氧化、抗菌、抗炎作用。[1]In VitroPinocembrin(5,10,25,50,100或200μM,24小時)顯著降低RBL-2H3細胞的細胞活力[1]。 Pinocembrin(25或50μM)抑制iNOS,PGE-2和COX-2水平,增加p38-Mapk和IкB-α,并抑制IкB-α的磷酸化[1]。細胞活力測定[1]細胞系:RBL-2H3細胞濃度:5,10,25,50,100或200μM孵育時間:24小時結果:在≥100μM時細胞活力降低~50%。在較低濃度下顯示75%的細胞活力。[1]數據來源文獻[1]. Hanieh H, et al. Pinocembrin, a novel histidine decarboxylase inhibitor with anti-allergic potential in in vitro. Eur J Pharmacol. 2017 Nov 5;814:178-186.規格5mg 10mM*1mL in DMSO 10mg 20mg單位瓶為競爭性的組氨酸脫羧酶 (histidine decarboxylase) 抑制劑。